法匹拉韦抑制病毒基因组的复制，这是在药物添加时间测试中病毒增殖周期中间表现最明显的。在嘌呤核苷或嘌呤碱基存在下，法匹拉韦的抗病毒活性减弱，表明法匹拉韦与嘌呤核苷而不是嘧啶核苷竞争。8)Madin Darby犬肾（MDCK）细胞很好地用作流感病毒的体外测定。MDCK细胞用法匹拉韦处理，细胞代谢物采用HPLC分析。检测到法匹拉韦呋喃糖基-5′-三磷酸（法匹拉韦-RTP）、法匹拉韦呋喃核糖（法匹拉韦-R）和法匹拉韦核呋喃糖基-5′-单磷酸（法匹拉韦-RMP）。
这些结果表明，一旦法匹拉韦被掺入细胞中，就会发生活化。化学合成法匹拉韦-RTP，并通过掺入32P-GTP。法匹拉韦-RTP抑制病毒RNA聚合酶活性，浓度范围从纳摩尔到微摩尔。法匹拉韦和法匹拉韦-RMP均不影响100μmol/L的流感RNA依赖性RNA聚合酶（RdRp）。这些结果表明，法匹拉韦作为前药发挥其抗病毒活性，因为法匹拉韦在细胞内磷酸化为活性形式法匹拉韦-RTP，其通过与病毒RNA聚合酶相互作用来抑制病毒复制。
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