接种乙型肝炎疫苗是预防HBV感染的最有效方法，除新生儿外，接种疫苗前均需先进行化验，如果乙肝表面抗原和表面抗体检查均为阴性，转氨酶正常，就可以注射乙肝疫苗。乙肝疫苗接种时间一般在0、1、6个月时分别注射一次，此方案称为0、1、6方案。如果新生儿的父母均没有乙肝，该新生儿在出生后应尽快（24小时内）给予乙肝疫苗注射，方法同此方案。注射部位新生儿为大腿前部外侧肌肉，儿童、成人为上臂三角肌。对于母亲一方为单纯表面抗原阳性的新生儿最好是乙肝疫苗联合应用高效价的乙肝免疫球蛋白。免疫成功的标志是乙肝表面抗体转为阳性，接种乙型肝炎疫苗后有抗体应答者的保护效果一般至少可持续12年。
一般人群不需要进行抗-HBs监测或加强免疫，但对高危人群可进行抗-HBs监测，如抗-HBs＜10mIU/ml，可给予加强免疫。如果新生儿的父母均没有乙肝，新生儿乙肝疫苗接种时间在出生后远快越好，一般在8小时内给予基因工程乙肝疫苗1支肌肉注射，注射部位为上臂三角肌（儿童、成人都一样），1个月后，再打1支，6个月后再打1支，一共3针，此方案称为0、1、6方案。儿童和成人打疫苗前应该先进行化验，如果乙肝三系统检查均是阴性，转氨酶正常，可以按0、1、6方案进行乙肝疫苗接种。免疫成功率为90%以上，免疫成功的标志为乙肝表面抗体转为阳性，保护时间为2年以上，接种者应该定期复查乙肝三系统，只要表面抗体依然存在，证明免疫能力依旧。
乙肝疫苗有效期为5年-7年，但是乙肝疫苗接种后产生的抗体水平随乙肝疫苗接种时间的变长可能逐渐下降。一般接种疫苗，注射3针后1个月97%的人都可以检测到表面抗体；但是到了第2年仍保持在这一水平；到了第3年降到74%左右，抗体滴度也下降。是否需要再次接种疫苗，主要是要在测定乙肝表面抗体后，决定。乙肝表面抗体滴度等于或者小于10国际单位/毫升者，应该在半年内接种。如果抗体滴度大于10国际单位/毫升可在6年内复种。就我国状况的多数学者建议免疫后3年内加强1次为好。
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