g724s是奥希替尼的ex19del特异性抗性机制

　　通过对突变肿瘤蛋白的选择性抑制剂的开发已经观察到了显着的进展。突变选择性的第三代表皮生长因子受体tkis的设计和临床实施，如奥希替尼，是一个很好的例子。不幸的是，尽管有这些进展tki治疗的耐药突变的发展，仍然是阻碍egfr突变非小细胞肺癌患者获得最佳治疗结果的重要障碍。除了先前发现的c797s抗性突变外，我们的结果显示奥希替尼抗性可能以g724s突变的形式出现在egfr激酶结构域的p环中。然而，与c797s不同，我们的结果还表明g724s介导的抗性优先发生在ex19del，而不是l858r。事实上，在结构层面上广泛的原子细节模拟，多种独立的体外模型，以及病人基因组分析，都证明g724s是奥希替尼的ex19del特异性抗性机制。回顾性地，我们确认了目前在文献中观察到的多个病例，其中egfrex19del突变的nsclc患者在存在g724s的情况下，显示肿瘤进展后奥希替尼治疗。

　　加上我们在这里提供的数据，这些案例研究表明g724s的功能是等位基因特异性的抗性突变。据我们所知，我们的研究是第一个直接证明潜在的激活突变影响特定tki选择压力下的抗性突变的出现的证据。l858r的c-螺旋稳定性增强是由于取代的精氨酸和邻近的负电荷氨基酸之间的极性相互作用。相比之下，ex19del突变增强的c-helix稳定性可能是由于3c界面的改变。我们的活动态删除模型与egfrwt的结构重叠表明，l747在wt中的位置被e746_a750del中的s752和e746_s752>v中插入的缬氨酸所占据。我们的数据表明，由g724s引起的p环构象变化导致了c螺旋内向构象在极性3c界面取代时的不稳定性。有趣的是，ex19del/g724s显示出与ex19del相似的磷酸化-egfr水平，但与ex19del/c797s相比磷酸化-egfr水平降低了。我们的模型表明，在引入g724s后，c螺旋的稳定性在不同的突变体之间会有所不同。同样，c797s可能优先稳定特定外显子变异体的c螺旋向内构象。C797是结构独特的催化脊柱(c脊柱)的关键成员。C-spine对富含甘氨酸的环和3c连接区所形成的界面没有贡献。然而，以前的网络分析麦克伦登等人表明，动态的甘氨酸富含环和c脊柱可能是高度相关的。因此我们怀疑c797s可能会影响域间的相关性。

　　g724s是奥希替尼的ex19del特异性抗性机制，从根本上说，我们的观察与临床肿瘤学家所熟悉的概念相似——突变蛋白的序列变异会影响药物的结合。奥希替尼与t790m的亲和力高于非t790m的egfr突变体。在这里，我们指出，在考虑tki抗性机制时，也应该考虑与原始激活突变相对应的序列变化。我们的发现有几个重要的临床意义。首先，我们进一步了解了一种新的奥希替尼抗性突变，这是体外研究所没有预测到的。最近的研究表明，g724s在奥希替尼耐药性肿瘤中的流行程度可能与c797s相当。然而，两者之间存在关键的区别。虽然包含egfr突变体的c797s(例如ex19del/c797s)恢复了对第一代egfrtkis、erlotinib和gefitinib的敏感性，但同样包含egfr变体的g724s对这些抑制剂具有交叉耐药性。

　　事实上，有一个正在进行的第一阶段临床试验，用奥希替尼和吉非替尼联合治疗治疗无生长因子受体突变的非小细胞肺癌患者。本试验旨在验证吉非替尼(gefitinib)绕过c797s介导的奥希替尼抗性可延长反应的假设。这个概念显然不适用于g724s介导的奥希替尼抵抗的病人。然而，我们的结果支持afatinib疗法在治疗缺乏t790m的奥希替尼疾病进展的ex19例患者中的作用。此外，在g724s可能是其他癌症的独立致癌因素的情况下，我们的研究结果建议使用现有的fda批准的抑制剂可能的治疗策略。这种水平的证据对于指定具有不确定临床意义的变异(例如孤立的g724s突变)进入临床试验(例如nci匹配(nct02465060)是至关重要的。这些临床结果源于egfr激酶的结构扰乱。对这些扰动的详细机制理解可以为指导治疗干预提供重要的见解。就在提交现在的手稿之前，法桑克等人发表了对egfrg724s介导的奥希替尼的结构基础的研究。

　　作者将基于结构的egfrwt与egfrd770_n771insnpg耦合，利用短的单轨道cmd模拟得到p环rmsf计算。具体来说，当引入g724s时，fassunke等人证明了wt和e746a750del中rsf的升高。根据这个结果，作者假设了两个潜在的，相反的机制g724s介导的第三代tki阻力:空间排斥抑制剂，或失去与抑制剂的重要相互作用。然而，仅仅使用rmsf计算很少能够提供详细的机制洞察。此外，奥希替尼抗性发生在ex19del/g724s突变体，而不是g724s单一突变体。在这里，我们在奥希替尼或afatinib存在和不存在的情况下，进行了多次独立的gamd增强取样模拟，总共超过23s。对于每个egfr突变体，我们计算了奥希替尼和afatinib的相对结合自由能以及载脂蛋白结构的构象自由能分布。虽然我们的rmsf计算与fassunke等人一致，我们的结果进一步表明g724s超稳定富甘氨酸p-loop的a-bend构象。这阻止了f723苯环与奥希替尼吲哚环的接触。我们的计算表明，l858r可逆地与奥希替尼结合，其亲和力高于ex19del，因此f723-奥希替尼接触的丢失不能破坏l858r的结合。在ex19del中，g724s的加入使共价加合物形成所必需的可逆复合物不稳定。

　　此外，我们还发现了ex19del/g724s和l858r/g724s在p-loop构象偏好上的差异。除了我们在图1中的发现之外，l858r/g724s可能没有足够的平衡来容纳底物结合vs.ex19del/g724s，导致l858r/g724s在非对称二聚体中作为催化效率低下的接收者激酶发挥作用(补充图s7g-h);然而，还需要额外的实验来验证这一假设。也有可能l858r/g724s构象与l858r相比，不那么容易支持二聚化。L858r/g724s的c螺旋在模拟过程中向外弯曲，表明局部不稳定性增加。尽管仍然倾向于相对于wt的活跃状态，但随着模拟时间的延长，l858r/g724s的c螺旋可能比l858r更快地转变为不能支持不对称二聚化的状态。

　　重要的是，我们的模拟还表明，g724s增加了e746s752ex19del变体的egfr活性构象的稳定性，但降低了e746a750del变体的稳定性。E746_s752>v/g724s活性c-inward构象的稳定性较高，这可能解释了g724s非小细胞肺癌患者基础医学队列中ex19del的丰富性。有趣的是，在fassunke等人提供的基因组分析数据中，所有患者都看到了在奥希替尼治疗后g724s分子部分的增加，而且所有患者都有不常见的ex19del(20)变异。这些发现对其他非egfr突变的癌症也有影响。例如，大约5%的非小细胞肺癌(47例)可以发现alk(间变性淋巴瘤激酶)重排。超过12个融合伙伴已经被确定为alk+癌症(47个)。

　　即使是alk+nsclc中最常见的融合伙伴，棘皮动物微管相关蛋白样(eml4)，也有大于10个独特的融合变异体(48个)。此外，靶上获得的对第一代和第二代alktkis的抗性大约以一打独特的错义突变的形式发生。最近的数据表明，一个特别顽固的alk溶剂前端突变，g1202r，更有可能在eml4-alke6;a20(v3)融合环境中引起耐药性，而不是更常见的eml4-alke13;a20(v1)融合。

　　g724s是奥希替尼的ex19del特异性抗性机制，总之，我们已经采用了一个跨学科的计算和实验方法，提供了证据表明，在目标靶上，egfr突变的nsclc的osimerb抗性是以等位基因特异性的方式发生的，这取决于潜在的突变。我们的数据支持了ex19del/g724s奥希替尼抗性的潜在结构机制，为tki-egfr相互作用的进一步研究打开了大门。我们希望这些机制性研究将被用来开发新的egfrtkis，规避多重耐药突变。最后，我们希望我们的研究成果能够应用于，针对其他基因定义的癌症开发更有效的靶向治疗。奥希替尼哪里购买？奥希替尼怎么去国外购买？详情请扫码咨询：