来那替尼(neratinib)耐药性对细胞表型的影响

　　来那替尼（neratinib）正在进行 3 期临床试验，但不幸的是，耐药性的发展是不可避免的。在这里，我们研究了获得性来那替尼耐药性对细胞表型的影响以及这种耐药性的潜在机制。

　　方法：

　　开发了耐来那替尼的 HER2 阳性乳腺癌细胞变体，并使用细胞毒性试验研究了它们的交叉耐药性。类似地，评估了曲妥珠单抗耐药和拉帕替尼耐药细胞对来那替尼的敏感性。使用迁移、侵袭和失巢凋亡测定评估细胞表型变化。进行了 HER 家族成员和药物外排泵的免疫印迹以及酶活性测定。

　　结果：

　　来那替尼（neratinib）耐药性赋予曲妥珠单抗、拉帕替尼和阿法替尼交叉耐药性。此外，来那替尼在曲妥珠单抗和拉帕替尼耐药细胞中的疗效降低。来那替尼耐药细胞比药物敏感细胞更具攻击性，CYP3A4 活性增加被认为是来那替尼耐药的新机制。

　　结论：

　　增加的 CYP3A4 活性作为生物标志物和/或目标为来那替尼（neratinib）增加价值的潜力值得研究。

　　据估计，大约 70% 的 HER2 过表达肿瘤的乳腺癌患者对 HER2 靶向药物具有先天耐药性或获得性耐药性。因此，尽管来那替尼（neratinib）的临床试验数据表明许多患者正在获得初步益处，但关于来那替尼耐药性对细胞的影响的可用信息存在差距；当这种情况不可避免地发展时。出于这个原因，过去几年进行的研究一直试图了解来那替尼耐药的机制，以便预测、预防或逆转它。2012 年，Seyhan等人使用 SKBR3 作为细胞系模型以及他们描述的全基因组功能性 RNAi 筛选报道了抑制与来那替尼耐药相关的多个基因。2014 年，通过临床前体外和体内研究以及对大约 3500 名患者标本的分析，我们发现 Neuromedin U 与 HER2 过度表达肿瘤患者的不良预后相关，我们的临床前研究表明 NmU 的过度表达与与对包括来那替尼在内的一系列 HER2 靶向药物的耐药性显着相关。在努力确定如何控制 Neuromedin U 表达的过程中，我们发现 miR-630（预测控制 Neuromedin U 表达）的缺失与 Neuromedin U 表达增加以及对包括来那替尼在内的 HER2 靶向药物的耐药性有关。为了进一步阐明来那替尼耐药的其他机制，进行了此处描述的研究。

　　发现这里开发的耐来那替尼（neratinib）细胞对所有其他研究的 HER2 靶向药物具有交叉耐药性。有趣的是，这种交叉耐药性是双向的，因为拉帕替尼耐药细胞和曲妥珠单抗耐药细胞也对来那替尼耐药。在临床试验中也观察到了这里观察到的趋势，因为Burstein等人发现未接受药物治疗的患者对来那替尼的反应比先前接受曲妥珠单抗治疗的患者更好。同样，据报道，既往曾接触过拉帕替尼的患者对来那替尼没有反应，以及那些之前没有接触过拉帕替尼的患者。因此，基于这种新的细胞系数据，可以假设，不幸的是，在来那替尼耐药的情况下，如果患者在接受来那替尼治疗时疾病进展，其他 HER2 药物的疗效会因之前的暴露而受到影响来那替尼。

　　除了对 HER2 靶向药物的交叉耐药性之外，HCC1954-NR 和 EFM192A-NR 细胞还发展出更具侵略性的表型，更具迁移性和侵袭性，避免失巢凋亡的能力增强。我们自己和其他人也观察到这种增加的细胞侵袭性与其他癌症类型的耐药性有关，并且与患者的不良预后有关；但以前从未与来那替尼相关。

　　为了阐明促进来那替尼（neratinib）耐药的机制，我们首先探讨了来那替尼耐药与来那替尼靶点之间的关联。在耐药变体中，来那替尼靶向的所有 EGFR 家族成员均减少。此外，HER3（不是来那替尼靶向的，而是与 HER2 异二聚化）也减少了。这些观察结果与典型的 HER2 耐药性相反，其中 EGFR 和 HER2 增加与拉帕替尼和曲妥珠单抗耐药性。药物靶点表达的减少可能是由于来那替尼的不可逆结合性质。这一理论得到了Azuma等人的研究结果的支持，与未接受药物治疗的对照细胞相比，阿法替尼耐药的 PC9 肺癌细胞下调了 EGFR、HER2 和 HER3。

　　此外，我们还评估了药物外排泵、PGP 和 BCRP。P-糖蛋白是常见的耐药性介质之一。与经典的耐药性相反，耐来那替尼（neratinib）的细胞表现出 PGP 的下调。这可能是因为来那替尼抑制 PGP 活性并可以逆转 PGP 过表达 MCF7 和 KBv200 细胞的多药耐药性。拉帕替尼也观察到了这种趋势，也发现拉帕替尼可降低 PGP 活性；但以前从未使用过来那替尼。BCRP 的过度表达与乳腺癌耐药性相关。然而，与 PGP 类似，BCRP 的表达降低表明它在来那替尼耐药中没有功能作用。

　　CYP3A4 是一种细胞色素 P450 代谢酶，在大约一半的药物的代谢中起作用，包括来那替尼（neratinib）。阿巴斯等人证明对健康成人同时服用酮康唑（CYP3A4 抑制剂）和来那替尼会增加来那替尼的峰值血浆浓度。尽管这并未与癌症相关联进行研究，但它向我们表明 CYP3A4 活性的改变也可能改变来那替尼在耐药性中的可用性。支持这一假设，我们观察到 CYP3A4 活性增加与来那替尼抗性，表明 CYP3A4 活性增加会增强来那替尼代谢，从而驱动来那替尼抗性。此外，在来那替尼耐药变体中用酮康唑阻断这种增加的 CYP3A4 活性的初步努力显示出显着的，尽管有限的，来那替尼敏感性的恢复。在来那替尼之前优化酮康唑的酮康唑浓度和测序时间的未来研究可能会实现对来那替尼更显着的再敏化。

　　来那替尼（neratinib）耐药性的第一项研究表明，它的发展赋予了对一系列 HER2 药物的耐药性。P-糖蛋白和 BCRP 显然在这种抗性中没有发挥作用。HER2 家族成员表达的减少/丧失——因此它们对药物靶向的可用性降低——可能是一个促成因素。然而，特别令人感兴趣的是 CYP3A4 活性的增加。现在有必要对 CYP3A4 活性作为可能的反应预测生物标志物和作为规避耐药性的靶标（从而增加来那替尼的价值）进行进一步研究。微信扫描下方二维码了解更多：