易瑞沙/吉非替尼联合多西他赛的作用

　　最近的临床试验表明，表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂易瑞沙/吉非替尼和化疗的序贯联合可延长EGFR突变的晚期非小细胞肺癌（NSCLC）患者的PFS和OS。本研究的目的是评估最佳组合序列并探索其可能的机制。

　　方法

　　PC-9 细胞和 A549 细胞，分别具有突变型和宽型 EGFR 的肺腺癌细胞，分别用多西他赛/吉非替尼单独或以不同的组合方案处理。EGFR 和 K-ras 基因状态通过 qPCR-HRM 技术确定。MTT法检测细胞增殖。Western blot检测EGFR、ERK、Akt和IGF-1R的表达和磷酸化。通过流式细胞术观察细胞周期分布。

　　结果

　　仅依次施用多西他赛和吉非替尼 (D→G) 才能在两种细胞系中产生显着的协同效应（组合指数 <0.9）。反向序列 (G→D) 导致两种细胞系中的拮抗相互作用 (CI>1.1)，而同时给药 (D+G) 在 PC-9 细胞和A549 细胞中的拮抗加成效应。机制研究表明，多西他赛诱导的 EGFR 和 ERK 磷酸化被随后使用的吉非替尼抑制，但不会被同时使用吉非替尼抑制。吉非替尼抑制的 EGFR 和 ERK 磷酸化不会被同时或随后的多西紫杉醇给药逆转。D+G 增强了它们对 PC-9 细胞中 IGF-1R 磷酸化的抑制作用。

　　结论

　　易瑞沙/吉非替尼之后的细胞毒性药物可能是 EGFR 突变 NSCLC 细胞抗增殖作用的最佳组合，EGFR 和 ERK 的磷酸化可能有助于这种作用。

　　本研究在 PC-9 细胞（EGFR 突变体，K-ras WT）和 A549 细胞（EGFR WT，K-ras 突变体）中研究了吉非替尼和多西他赛在三种不同组合方案中的序列依赖性抗增殖作用。当吉非替尼和多西他赛单独用于两种细胞系时，吉非替尼对PC-9细胞的抑制作用明显强于对A549细胞的抑制作用，这与之前的报道一致。然而，吉非替尼的IC50在PC-9中仅为A549的一半；而在临床工作中，吉非替尼对EGFR突变患者的疗效远超多西他赛。我们认为这可能是因为在体外研究中，测试剂直接对靶细胞的应用，但在体内研究药物通常通过循环系统给药，这会影响不同药物的分布和浓度。

　　我们的结果还表明，多西紫杉醇继以易瑞沙/吉非替尼 (D→G) 不仅在 EGFR 突变体和 K-ras WT PC-9 细胞中的抗肿瘤作用显着优于其他模式，而且在 EGFR WT 和 K -ras 突变 A549 细胞。这与几项临床前研究一致，该研究招募了一组接受化疗/EGFR-TKI 治疗的不同肺癌细胞系，并报告化疗→EGFR-TKI 的顺序优于其他方式。包括 WJTOG0203、INFORM 和 FASTACT-2 在内的一些 III 期临床试验也证实，化疗后序贯 EGFR-TKI 显着改善了结果。因此，我们的研究结果为克服 EGFR-TKI 和化疗的治疗平台提供了强有力的临床前支持，并且可能对对抗难治性 NSCLC 尤其重要。需要注意的是，在本研究中，在 EGFR 野生型细胞系中也观察到了 D→G 协同作用。尽管一些临床前和临床试验也报告了类似的结果，但更多的数据表明野生型 EGFR 患者无法从 EGFR-TKI 治疗中受益。我们推测这是因为在我们的研究中对每个细胞系应用了 IC50 剂量的易瑞沙/吉非替尼，这意味着与 PC-9 细胞相比，A549 细胞使用了千倍的吉非替尼。临床工作中显然无法直接复制这种极高剂量的EGFR-TKI，但相对高剂量的EGFR-TKI已经在脑转移的NSCLC患者中进行了尝试并取得了阳性结果。如果在此类亚组中尝试并成功采用类似模式，对野生型 EGFR 患者尤其有益。

　　总的来说，我们的数据表明，在临床工作中可用的组合方式中，最有效的方法是先使用细胞毒药物，然后使用易瑞沙/吉非替尼。EGFR 和 ERK 的磷酸化可能促成了这种协同作用。然而，由于只有两个细胞系在该研究中登记的，扩张的NSCLC细胞系具有不同EGFR状态以及所述面板在体内动物模型研究来进一步评估依赖日程效果。还值得在临床试验中比较三种联合方案，以确定晚期 NSCLC 患者可能的“最佳”治疗方式。微信扫描下方二维码了解更多：