尼达尼布对a549细胞中sp-d有刺激作用

　　在这项研究中，我们第一次证明了尼达尼布在mrna和蛋白水平上诱导人肺上皮细胞sp-d的表达。这种效应是通过jnk-ap-1途径介导的，在选择性jnk抑制剂预处理细胞后，这种效应就消失了。实验结果表明，无论浓度多少，尼达尼布均不影响a549细胞的增殖和死亡。此外，我们的数据表明，即使存在酪氨酸激酶抑制剂fgfr、pdgfr和vegfr，尼达尼布诱导的sp-d表达也会发生。另外，还发现经过尼达尼布处理的小鼠肺组织中sp-d的表达水平也有所增加。尼达尼布最初是作为一种有效的酪氨酸激酶胞内抑制剂开发的，然而，我们发现尼达尼布对a549细胞中sp-d有刺激作用，这是通过有丝分裂原激活蛋白激酶的jnk信号介导的。虽然有报道说mapk介导sp-d在人角膜上皮细胞中的表达上调，但这种作用尚未在人肺上皮细胞中进行研究。Mapks在各种细胞和环境压力下被激活，例如渗透压或新陈代谢的变化、dna损伤、热休克、缺血、炎症细胞因子、剪切应力、紫外线照射、神经酰胺和氧化应激。

　　在这项研究中，发现尼达尼布激活jnk-ap-1通路，导致sp-d上调。这种作用似乎与酪氨酸激酶抑制无关，因为阻断fgfr、vegfr和pdgfr并不影响尼达尼布诱导的sp-d表达。这一观察表明，尼达尼布发挥作用的机制不同于已知的酪氨酸激酶抑制剂的作用。另外，在src激酶抑制剂dasatinib的存在下，尼达尼布上调了sftpdmrna的表达。本研究表明，尼达尼布上调sp-d表达的机制不同于其作为src激酶抑制剂的作用。虽然在本研究中，尼达尼布刺激a549细胞的mapk信号通路，但据报道它也能抑制mapk和akt信号通路，这有助于内皮细胞、周细胞和平滑肌细胞的血管生成，从而抑制细胞增殖和凋亡。然而，在这项研究中，尼达尼布对a549细胞的mapk有相反的作用。虽然sp-d现在被广泛用作ipf的生物标志物，但最近的研究表明，sp-d除了作为先天免疫系统分子的作用之外，对各种病理状态也有有益的影响。

　　相当多的注意力集中在阐明诱发特发性肺纤维化的致病机制上，并且在损伤后肺泡上皮细胞的凋亡已被证明可以加速病情的进展。Sp-d降低了小鼠的肺泡巨噬细胞凋亡率，但这一结果可能与sp-d对人肺上皮细胞a549的影响无关。在目前的研究中，我们并没有研究尼达尼布对细胞凋亡的直接影响，但是，尼达尼布诱导的sp-d表达可能抑制上皮细胞的凋亡，未来的研究应该检验这种可能性。例如，破坏dna的抗癌药物依托泊苷和喜树碱通过激活jnk-c-jun通路与凋亡诱导有关。然而，c-jun蛋白与诱导和预防细胞凋亡都有关系，c-jun激活是促进还是预防细胞凋亡高度依赖于所研究的细胞类型。此外，通过mapk通路激活表现出来的基因表达模式很可能存在很大差异(甚至在同一类型的细胞中也是如此)，并且依赖于细胞所受到的刺激。因为a549细胞最初来源于肺癌标本，所以人们担心尼达尼布诱导的mapk信号可能会导致a549细胞的异常增殖和生长，或者通过jnk磷酸化诱导细胞凋亡。但是，根据细胞增殖实验结果，在实验浓度范围内，尼达尼布对细胞增殖和凋亡无影响。

　　尼达尼布对a549细胞中sp-d有刺激作用，在目前的研究中，我们观察到尼达尼布不影响sp-b在a549细胞中的表达水平。在人类细胞中，没有供体降低sp-b启动子的活性，这是通过增加ap-1结合介导的，而sp-b的减少也是c-jun过度表达的结果。在原代大鼠ii型肺细胞中未发现sp-d基因表达下降[30]。因此，这些数据表明，不同的作用机制调节ap-1对sp-b和sp-d基因表达的影响。我们的观察结果与这些报道一致，因为无论jun蛋白磷酸化程度如何，尼达尼布都不能刺激sftpbmrna的表达，这意味着尼达尼布诱导的sftpd表达是相对特异的ー至少在a549人肺上皮细胞中是如此。为了检测尼达尼布在体内的作用，我们给c57bl/6小鼠注射了尼达尼布，并用实时定量rt-pcr和westernblot分析检测了sp-d在肺中的表达。我们观察了提高尼达尼布治疗小鼠肺中sftpdmrna表达的情况。由于小鼠在sftpb基因的5′-侧翼区域也有ap-1识别序列，因此我们分析了经尼达尼布处理的小鼠肺组织中sftpb的表达，结果提示尼达尼布抑制了sftpbmrna的表达。尽管在sftpb启动子区域存在一个一致的ap-1位点，但是仍有报道表明jun依赖性抑制sftpb启动子的活性，这表明jun依赖性基因调控的机制不同。我们关于尼达尼布对sftpbmrna表达影响的观察结果与先前的研究相一致，这表明ap-1介导了sftpb的抑制作用。

　　虽然sftpdmrna表达在尼达尼布治疗的小鼠肺中表现出上调，但结果并不具有统计学意义，尼达尼布对a549细胞中sp-d有刺激作用。这个结果可能是由于使用了整个肺匀浆，这可能降低了实验的灵敏度。在体内研究中使用的剂量与先前的研究相当。Westernblot分析显示，经尼达尼布处理的小鼠肺组织中sp-d蛋白表达上调与尼达尼布处理有关，这些体内观察可以使我们的体外研究在生理上具有相关性。本研究有两个主要局限性。首先，我们用a549细胞作为ii型肺细胞模型。然而，a549是一个来源于人肺腺癌的连续细胞系，因此a549细胞具有不同于正常肺上皮细胞的生物学特性。其次，本研究中使用的尼达尼布的浓度似乎高于人体每天摄入300毫克尼达尼布所达到的cmax。然而，在体外测试化合物时，这种差异很常见，而且这项研究中使用的浓度与先前研究中使用的浓度相当。为了解决这个问题，我们需要在临床试验中探讨尼达尼布对sp-d表达的影响。尼达尼布好买到吗？服用尼达尼布要多少钱一个月？详情请扫码咨询：