劳拉替尼基于靶向NGS的聚合酶链反应

　　劳拉替尼基于靶向NGS的聚合酶链反应？为了确定对患者的耐药机制，我们获得了肝损伤的活检标本，该样品在患者接受劳拉替尼期间正在扩大，因此我们可以进行分子检测。 FISH显示ALK重排，没有ALK扩增的迹象。由于MET被克唑替尼抑制并且已被确定为对更具选择性的第二代ALK抑制剂的潜在耐药机制，我们进行了FISH以确定MET是否被扩增（即，肿瘤DNA中有多个MET拷贝）。

　　没有观察到MET扩增。使用基于靶向NGS的聚合酶链反应（PCR）分析（称为Snapshot NGS），我们在ALK激酶结构域中鉴定了两个突变：C1156Y（先前在该患者的克唑替尼后活检中检测到）和L1198F。通过Snapshot NGS未检测到38个与癌症相关的基因（例如EGFR和KRAS）的其他突变。劳拉替尼基于靶向NGS的聚合酶链反应？劳拉替尼一个月多少钱？

　　ALK C1156Y是已知的克唑替尼抗性突变，而据报道，ALK L1198F在间变性甲状腺癌中是功能获得性突变，在核磷蛋白-ALK重排的细胞系中是与F1174V结合的布加替尼抗性突变。妇女的肿瘤中有22个C1156Y和L1198F突变以相似的频率出现（分别为29％和35％），表明这两个突变位于ALK融合基因的同一等位基因上。

　　劳拉替尼基于靶向NGS的聚合酶链反应？为了证实这一点，我们从冷冻肿瘤标本中提取的互补DNA中扩增了EML4-ALK，将PCR产物亚克隆到pCR4-TOPO载体中，并对单个菌落进行了测序。这两个突变位于同一等位基因上。接下来，我们在治疗前，患者接受克唑替尼治疗后疾病复发后，以及患者接受氯雷替尼治疗后疾病复发后，对患者治疗前的肿瘤组织样品进行了全外显子测序。我们在耐氯雷替尼的样本中检测到双重突变（ALK C1156Y–L1198F），对耐克唑替尼的样本检测到单一ALK C1156Y突变。在治疗前肿瘤中也以低频检测到ALK C1156Y。携带ALK C1156Y的肿瘤细胞比例在预处理肿瘤中小于7％，在对克唑替尼耐药的肿瘤中约占50％，在对氯雷替尼耐药的肿瘤中约占100％。仅在耐氯雷替尼的标本中检测到ALK L1198F突变。