哌柏西利(Palbociclib)可引起人肾小管上皮细胞周期阻滞及老化

　　探讨哌柏西利（Palbociclib）药物对肾小管上皮细胞发育及细胞损伤的影响。

　　方法：

　　微生物培养肾小管上皮细胞HK-2合并不同浓度（0、1、5、10、20 μmol/L）的哌柏西利进行处理，通过细胞计数和CCK8法检测不同浓度及时间下哌柏西利对HK-2细胞EDU采用分析检测不同浓度下Palbiclib对HK-2作用5d后的细胞病变情况。后续检测Palbociclib对HK-2细胞生长周期分布的影响。 RT-PCR检测P16、P21、P53及相关降解表型的mRNA相对水平表达，蛋白质印迹检测P16、P21和P53的蛋白表达情况。

　　结果：

　　哌柏西利抑制HK-2细胞产生并引起细胞周期阻滞于G1期。增殖抑制效果最为明显（P<0.01）。哌柏西利诱导HK-2细胞生长周期主要阻滞于G1期，而进入小号期的细胞数相比于对照组来说明显减少（P<0.01）。Palbociclib可导致HK-2细胞发生细胞退化，SA-β-GalC12FDG通过老化和检测，结果抗在哌柏西利作用下，HK-2细胞的细胞内退化相关半毒性显着表现。RT-PCR及Western印迹结果显示Palbociclib可明确上调HK-2细胞中P16、P21、P53等老化相关因子的基因和蛋白表达水平（P< 0.01）。细胞中退化相关因素导致基因表达也升高（P< 0.01）。

　　结论：

　　哌柏西利（Palbociclib）可通过抑制HK-2细胞生长并阻滞其细胞缓慢发生，导致HK-2细胞衰老发生。

　　肿瘤与CKD间存在关联，特定类型的慢性病患者出现概率较普遍，个体正常的患者中CKD发生率较明显。视角的中性抗肿瘤药物的作用吸引关注。

　　哌柏西利（Palbociclib）作为一种新型的抗肿瘤药物，其属于CDK4 / 6周期蛋白抑制剂，临床上主要用于乳腺癌的治疗。哌柏西利主要通过诱导肿瘤细胞生长周期停滞而起到抗肿瘤的作用。本研究在剧烈实验中，将Palbociclib作用于HK-2细胞可显着观察到细胞生长周期繁殖，并导致细胞进入老化状态。我们在本实验中分别采用了不同浓度Palbociclib作用于HK-2细胞，结果验证，当Palbociclib的工作浓度达到10μmol/L时，细菌对HK-2细胞表现出明显的抑制作用，并导致HK-2细胞老化。检测，我们进一步检测了P16、P21和P53等细胞老化标志物，发现Palboclib作用下HK-2细胞内老化标志蛋白表达明显，同时可包裹HK-2细胞合成老化相关表型因子增加，这说明，哌柏西利（Palbociclib）可引起肾小管上皮细胞发生老化。

　　细胞生命周期中一种稳定的生长状态，其特征在于细胞生长不会出现性阻滞。 P16，P21等蛋白可通过结合细胞周期蛋白进而调控细胞衰老。P53 / P21WAFI和RB-P16INK4A通路目前被认为是调控细胞衰老的重要机制。最近研究指出，启动P53 / P21WAFI途径可触发细胞衰老反应，随后激活RbP16INK4A通路以维持细胞衰老状态。CDK4 / 6周期蛋白抑制剂作用于肿瘤细胞后，P16表达上调，此外，过表达P16可促进细胞发生衰老中，Palboclibic 作用于本皮细胞后，细胞仪结果分析细胞周期明确研究小于G1期，随着作用时间延长，肾管上皮细胞中的SA-β-Gal。活性显明，并且，P53、2P1及P53、2P1及P53、2P1及P53、2P1及P53、P16等细胞生命周期相关酶调节分子表达上调，这说明哌柏西利诱发肾小管上皮细胞衰老可能依赖于P53/P21WAFI或Rb-P16INK4A途径。

　　逐渐细胞可产生大量有害表型（SASP），可以引发产生反应。 此外，SASP 诱导细胞生物，老化的细胞变成癌症干细胞后可能发生的可能性。因此，CD4/ 6 如果诱发产生的衰老细胞，持久性存在则可能对短期治疗以及癌症转移和扩散产生潜在的影响。本研究中，Palboclib 作用下可促进肾小管上皮细胞发生老化并合成 SASP，这提示 Palboclib在临床中深抗的同时，可能会产生患者肾功能的远期影响。近期研究提出，细胞发育是逐渐退行的进展的重要机制。细胞衰老通过SASP原因引发细胞衰老反应及纤维化，生成器官纤维化的生成。我们之前的研究表明，在顺铂致小鼠肾脏纤维化模型中顺铂所致肾小管上皮细胞衰老发挥了重要作用。因而肾脏衰老细胞被认为是引发肾脏纤维。其他患者如长期应用哌柏西利也可能通过毁灭细胞衰老而促进三分子。

　　综上所述，本研究发现哌柏西利（Palbociclib）可抑制肾脏小管上皮细胞增生，并导致肾脏小管上皮细胞衰老。这提示我们在临床中对肿瘤患者尤其是合并有 CKD 的肿瘤患者纤维化的进展及远期肾功能的进展。微信扫描下方二维码了解更多：