色瑞替尼增强曲美替尼的疗效

　　对于黑色素瘤缺乏BRAF或NRAS突变（约 35% 的病例）的异质人群，目前缺乏靶向治疗方案。我们进行了化学生物学筛选，以确定这一未充分研究的肿瘤组的潜在新药物靶点。针对 240 种靶向药物筛选 8 种BRAF/NRAS-WT 黑色素瘤细胞系，确定色瑞替尼和曲美替尼是具有单一活性的潜在目标。色瑞替尼在大多数BRAF/NRAS试验中增强了曲美替尼的疗效-WT 细胞系和组合在 3D 球体培养和长期集落形成实验中显示出增加的细胞毒性。色瑞替尼和曲美替尼的共同给药导致体内异种移植BRAF/NRAS-WT 黑色素瘤模型中肿瘤生长的强烈抑制；这不是由于色瑞替尼对 ALK 的抑制。机制研究表明色瑞替尼-曲美替尼组合可增加对 MAPK 和 TORC1 信号的抑制。当BRAF/NRAS-WT黑色素瘤细胞用曲美替尼和TORC1/2抑制剂INK128的组合处理。我们接下来使用基于质谱的化学蛋白质组学并分别确定了已知和新的色瑞替尼靶标，例如 IGF1R 和 ACK1。验证研究表明，在曲美替尼存在的情况下，色瑞替尼可以通过以细胞系依赖性方式抑制 IGF1R 和/或 ACK1 来抑制 mTORC1 信号传导。我们的研究共同表明，将特定抑制剂（曲美替尼）与更广泛的靶向药物（色瑞替尼）组合对具有异质突变特征的肿瘤具有疗效。

　　已经在BRAF-WT 黑色素瘤患者中评估了单药曲美替尼，并注意到一些部分反应。鉴于此，以及激酶抑制剂单一疗法通常会导致信号适应和抵抗的一般观察结果，我们推断曲美替尼将成为BRAF/NRAS-WT 黑色素瘤的良好主干疗法。然后，我们询问筛选中的哪些候选者将构成合适的联合合作伙伴，并根据色瑞替尼与曲美替尼的积极相互作用及其临床可用性确定了色瑞替尼。

　　色瑞替尼是一种多 RTK 抑制剂，已获得 FDA 批准用于治疗 EML4-ALK 融合阳性非小细胞肺癌 (NSCLC)。据我们所知，色瑞替尼从未在黑色素瘤中进行过临床前或临床评估。色瑞替尼和曲美替尼的组合与长期集落形成实验和更接近模拟体内肿瘤微环境的3D 胶原植入球体测定中的细胞毒性增加有关。这些反应不仅限于BRAF/NRAS-WT 黑色素瘤，而且还在我们测试的BRAF和NRAS突变黑色素瘤细胞系中观察到。之前的工作已经展示了BRAF的进展- 突变黑色素瘤依赖于通过 MAPK 和 PI3K/AKT/mTOR/S6 信号通路的信号。观察到 PTEN 的缺失对于BRAF突变黑色素细胞从癌基因诱导的衰老中逃逸以及BRAF突变黑色素瘤在 GEM 模型中的启动都至关重要。我们自己小组和其他人的研究表明，适应性 AKT/mTOR 信号传导是BRAF突变黑色素瘤细胞从 BRAF 和 MEK 抑制剂治疗中逃逸的常见事件。这些发现不仅限于BRAF- 突变黑色素瘤，MEK 抑制剂和 TORC1/2 抑制剂之间的协同作用也报道了NRAS突变黑色素瘤。从机制上看，MAPK 和 PI3K/AKT/mTOR 似乎聚集在关键的细胞存活中心，它们的联合抑制导致细胞凋亡增加。

　　我们观察到曲美替尼和色瑞替尼的组合增加了对 pS6 的抑制。色瑞替尼作为单一药物对 pS6 水平几乎没有影响，表明其在抑制继发于 MEK 抑制后发生的信号适应方面的作用。曲美替尼和 mTOR 抑制剂 INK128 组合在 3D 球体细胞毒性测定中对曲美替尼-色瑞替尼组合进行表型复制的能力证明了双重 MAPK 和 TORC1 信号抑制的关键性质。

　　我们在此描述的结果与BRAF突变黑色素瘤和PIK3CA突变型乳腺癌的研究相似，其中 TORC1 的完全抑制（通过抑制 pS6 表示）分别是对 BRAF 和 PI3K 抑制剂敏感的生物标志物。在BRAF突变型黑色素瘤中，完全抑制 TORC1 是诱导细胞凋亡所必需的，而 PUMA 被确定为细胞死亡的关键介质。TORC1 抑制作为对许多不同靶向治疗反应的生物标志物的重要性反映了 pS6 作为来自多个上游输入的信号活性读数的核心作用。因此，最大的 pS6 抑制很可能反映了自适应信号的接近完全关闭。尽管色瑞替尼-曲美替尼联合用药对某些细胞系的抑制水平有时仅略高于单药曲美替尼，但这并不是说它不显着。即使是低水平的信号传导也足以让药物治疗后存活。这在接受 BRAF 抑制剂治疗的黑色素瘤患者中得到了最清楚的证明，其中需要 90% 以上的 pERK 抑制才能观察到疗效。

　　我们的数据一起说明了将高度特异性的药物如 MEK 抑制剂曲美替尼与广泛靶向的药物如色瑞替尼结合使用的效用。这种方法的效用在基因复杂的癌症中得到了证明，其中关键生长途径的有效抑制与多种信号适应的同时抑制相结合可以证明是非常有效的。微信扫描下方二维码了解更多：