阿西替尼(Axitinib)在肾癌中具有直接的细胞毒性抗肿瘤活性

　　包括阿西替尼（Axitinib）在内的酪氨酸激酶抑制剂(TKIs)因其抗血管生成特性已被引入到肾细胞癌(RCC)的治疗中。然而，目前还没有证据表明阿西替尼在肾细胞癌中具有直接的细胞毒性抗肿瘤活性。

　　在这里，我们通过western blot分析报告了阿西替尼诱导的DNA损伤反应(DDR)，最初的特征是γ-H2AX磷酸化和Chk1激酶激活，随后在a -498和Caki-2 RCC细胞中p21过表达，尽管其效力不同。通过免疫细胞化学分析细胞DNA中8-oxo-7,8-二氢-2 ' -脱氧鸟苷的存在，并使用对氧化还原敏感的荧光染料DCFDA进行流式细胞术分析，表明DDR反应伴随着DNA氧化损伤和活性氧(ROS)的产生。这种反应导致G2/M细胞周期阻滞，并诱导类似衰老的表型，伴有细胞增大和衰老相关的β-半乳糖苷酶活性增加，n -乙酰半胱氨酸(NAC)预处理可消除这种活性。此外，阿西替尼处理过的细胞通过有丝分裂灾难进入细胞死亡，荧光显微镜观察，其特征是微核和异常微管组装。

　　另一方面，阿西替尼（Axitinib）通过DDR诱导，也能增加表面NKG2D配体的表达。因此，药物治疗以ros依赖的方式促进了a -498 RCC细胞的NK细胞识别和脱颗粒。

　　总之，我们的结果表明，阿西替尼（Axitinib）对RCC细胞的细胞毒性和免疫调节作用都有助于抗肿瘤活性。

　　TKIs特别是阿西替尼（Axitinib）最近被批准用于晚期mRCC的治疗，主要是因为其抗血管生成的特性。在此，我们提供的证据表明，阿西替尼抗肿瘤活性也可能是其诱导DDR、细胞衰老和有丝分裂灾难的能力，并通过激活配体的调节，增强天然免疫效应细胞对RCC细胞的识别。

　　特别是，我们发现亚最佳剂量的阿西替尼治疗RCC可引发DDR，其表现为H2AX、Ser317-和Ser345-Chk1磷酸化水平和DNA氧化水平升高，导致细胞周期阻滞在G2/M期和细胞衰老。在随后的时间点，观察到细胞周期抑制剂p21过表达，Chk1激活和耗尽水平相应降低。因此，在PC-3前列腺癌细胞中，通过逆转录病毒介导的p21转导激活衰老程序，可以抑制Chk1激活。

　　我们还研究了氧化还原信号参与阿西替尼（Axitinib）治疗诱导A-498和Caki-2 RCC细胞衰老的能力。我们发现，药物暴露增加了ROS的生成并诱导了DNA的氧化，而用抗氧化剂NAC预处理会导致受损的细胞周期阻滞和SA-β-gal阳性细胞的百分比下降。

　　与我们的研究类似，据报道，用阿西替尼（Axitinib）治疗胃癌细胞可诱导衰老表型，其特征是细胞大小增加，SA-β-半乳糖苷酶表达，G2细胞周期期阻滞。

　　细胞周期阻滞和衰老常与有丝分裂灾难有关。Chk1是调节G2/M检查点的激酶，在dna损伤剂处理的细胞中，对防止有丝分裂灾难也特别重要。有丝分裂灾难被描述为抗癌药物诱导的细胞死亡的主要形式[48,49]。与坏死相似，有丝分裂灾难表现为质膜完整性的早期丧失，大细胞中含有未浓缩的染色体[50]。阿西替尼治疗导致细胞发生坏死样死亡和继发性坏死的频率增加，以及以多核、微管组装异常、早期膜通透和caspase 3活化和DNA片段等凋亡特征缺失为特征的有丝分裂灾难。

　　我们还证明了MICB对A-498 RCC细胞和ULBP-1对Caki-2细胞的诱导需要ROS信号作为配体上调，这对NAC预处理是敏感的。相比之下，在NAC预处理的Caki-2细胞中，阿西替尼诱导的MICA表达增加没有明显的逆转。此外，根据之前的证据，NKG2D和dnam1配体在基因毒性药物[52]治疗的衰老表型肿瘤细胞上表达，我们发现MICB在阿西替尼治疗的衰老a -498 RCC细胞上优先表达。与阿西替尼一样，其他TKIs如索拉非尼和舒尼替尼已被描述诱导鼻咽癌细胞[53]中MICA/B的表达，但它们与衰老表型的相关性尚未报道。

　　基于这些发现，阿西替尼（Axitinib）与其他免疫治疗方法(如抗程序性死亡-1 (PD-1)或pd -配体-1 (PD-L1))的顺序或联合使用策略，应在前瞻性临床试验中进行试验。因此，一项I期研究正在评估阿西替尼联合抗pd - l1抗体avelumab (MSB0010718C)在晚期RCC (NCT02493751)患者中的安全性。

　　总之，我们的研究首先证明，阿西替尼（Axitinib）不仅抑制血管生成，而且可以通过诱导细胞周期阻滞和有丝分裂灾难，激活细胞衰老程序，对RCC细胞产生直接的基因毒性作用。阿西替尼对RCC细胞的直接细胞毒性作用可能部分解释了这种药物的相关胃肠道和血液学毒性。

　　此外，阿西替尼（Axitinib）还可以通过调节NK激活配体的表达，促进NK细胞介导的对RCC的识别和消除，从而显示免疫介导的抗肿瘤活性。更好地剖析RCC微环境中免疫细胞的功能和TKIs的免疫调节作用将是优化晚期RCC患者免疫治疗方法的关键。微信扫描下方二维码了解更多：