仑伐替尼(lenvatinib)联合长春瑞滨治未分化甲状腺癌的药理作用

　　甲状腺间变性癌(ATC)是一种罕见的肿瘤，预后差。对暴露于长春瑞滨、仑伐替尼（lenvatinib）及相关组合的ATC细胞株(8305C、8505C)进行增殖和凋亡检测。实时荧光定量PCR检测ABCB1、ABCG2、CSF-1 mRNA表达。作为人磷酸激酶阵列分析的一部分，研究了磷酸化Akt的相对水平，并用ELISA检测CSF-1和VEGFR-2的蛋白水平。采用反相液相色谱-串联质谱联用技术测定lenvatinib在ATC细胞中的细胞内浓度。用长春瑞滨、仑伐替尼或长春瑞滨加仑伐替尼治疗ATC裸鼠皮下移植瘤模型。

　　长春瑞滨、lenvatinib对ATC细胞有明显的抗增殖作用。长春瑞滨和lenvatinib的联合治疗显示出对所有受影响细胞的协同作用。在仑伐替尼 + vinorelbine联合处理的两种ATC细胞系中，ABCB1的表达均有所下降，同时仑伐替尼的细胞内浓度也有所增加。联合用药导致Akt、GSK3α/β、PRAS40和Src磷酸化水平以及CSF-1 mRNA和蛋白水平下降。在皮下肿瘤模型中，联合用药在治疗期间减少了肿瘤体积。

　　我们的结果建立了长春瑞滨和仑伐替尼（lenvatinib）联合抗ATC的协同抗肿瘤活性。

　　未分化甲状腺癌只占所有甲状腺癌的一小部分，但由于其侵袭性，导致大多数甲状腺癌死亡。ATC对任何已知的全身治疗，如放疗或化疗不敏感。因此，确定新的治疗方法是ATC研究的主要目标。前瞻性和回顾性临床试验尚未确定有效的药物或方案，在某些情况下，由于招募的患者[29]不足。对于不能手术或弥散性疾病的ATC患者，单独给予化疗药物是一种治疗选择，但整体细胞毒性药物并不有效。ATC对蒽环类、紫杉类、铂类衍生物和甲氨蝶呤等化疗药物的反应最小。局部异构酶II抑制剂阿霉素偶见完全缓解(和大量药物不良反应)，阿霉素仍是晚期[29]的首选化疗药物。然而，在临床前研究中，在ATC中证实了有效的药物组合，如伊立替康+舒尼替尼，拓扑替康+帕佐帕尼，或紫杉醇+仑伐替尼。在本研究中，我们探索了微管靶向药物长春瑞滨单独及其与TKIs lenvatinib或索拉非尼联合的临床前活性。来自临床前模型和临床试验的最新数据支持这一观点，即包括不同抗肿瘤类别的药物的联合治疗在ATC中具有协同抗肿瘤活性，这在最近的两篇关于这一问题的文献综述中得到了强调。临床前研究使用已经在食品和药物管理局或欧洲药品管理局注册的药物，用于治疗其他癌症，如长春瑞滨(如批准用于非小细胞肺癌)或仑伐替尼(如批准用于放射性碘治疗难治的分化甲状腺癌)。是建立合理基础的基础，以同情地使用这些组合在单个晚期ATC患者。它们也可以作为新的，虽然目前不常见，多中心临床试验的理论基础。因此，我们的研究是一项重要的努力，以解决评估批准的药物组合对ATC模型的需求;所以最有希望的可能会迅速转化为临床评估。

　　我们的研究结果表明，长春瑞滨单药治疗ATC细胞和体内肿瘤的疗效优于仑伐替尼（lenvatinib）单药治疗。综上所述，这些药物的联合用药在ATC细胞和ATC皮下模型中具有高度的协同作用。相比之下，尽管在我们手上索拉非尼在体外比lenvatinib表现出更高的抗增殖活性，但同时使用长春瑞滨和索拉非尼并没有表现出这种活性，而是具有明显的拮抗作用。因此，我们没有在我们的实验设置和动物模型中进一步测试该组合，而是将我们的努力集中在lenvatinib加长春瑞滨的协同方案上。

　　Jing和同事使用另一种微管靶向药物如紫杉醇联合lenvatinib也发现了类似的抗增殖作用。在那篇文章中，发现紫杉醇比仑伐替尼（lenvatinib）更有效，但与仑伐替尼（lenvatinib）(或紫杉醇)单药治疗相比，紫杉醇联合阻断集落形成显示协同作用并抑制裸鼠肿瘤生长，以及诱导凋亡。确实，有报道称长春瑞滨和紫杉醇等其他化疗药物都能诱导细胞在G2/M期的积累。G2/M期积累的细胞通过凋亡死亡，线粒体膜电位降低，caspase活化，磷脂酰丝氨酸外显。此外，Jing和同事描述了lenvatinib在我们研究中使用的同一ATC细胞系中增强了紫杉醇的细胞周期阻滞和凋亡作用。有趣的是，与lenvatinib或紫杉醇单独治疗相比，仑伐替尼和紫杉醇单药治疗均增加了细胞周期G2/M期8305C细胞的比例，其联合治疗可协同增加G2/M期细胞的比例。因此，可以想象，长春瑞滨和lenvatinib的联合可能对细胞周期产生相同的作用，增加G2/M期细胞的百分比。此外，在我们的体内实验中，通过增加活化的caspase 3免疫染色显示，该联合药物通过凋亡诱导ATC细胞死亡。最后，我们的研究和Jing及其同事的研究均表明，联合治疗显著降低了体内ATC肿瘤模型Ki67免疫染色(即一种增殖标记物)。

　　总之，在本临床前研究中，我们首次报道了长春瑞滨单用和长春瑞滨与仑伐替尼（lenvatinib）联合在体外和体内ATC细胞中的协同作用。所观察到的抗肿瘤作用是通过多种机制实现的:调节ABCB1转运体，降低CSF-1表达，增加仑伐替尼细胞内水平，抑制Akt/GSK3β/PRAS40通路，降低Src磷酸化状态。这些结果表明，由于这两种药物已经注册并用于其他类型的肿瘤，因此将这种组合方案应用于未来的临床试验或对患有晚期ATC的单个患者进行同情使用是很有意义的。微信扫描下方二维码了解更多：