索拉非尼/索拉菲尼的肿瘤抑制作用是通过改变肿瘤微环境

　　肿瘤微环境中需要大量转移的T细胞和各种免疫抑制因子和细胞，限制了过继性T细胞疗法（ACT）在临床上的应用。越来越多的证据表明，化疗药物在适当剂量的情况下可以作为免疫支持剂而不是免疫抑制剂，并且与免疫治疗联合治疗往往比单药治疗有更好的治疗效果。据报道，索拉非尼/索拉菲尼在高剂量和低剂量下对多种癌症的免疫调节作用存在争议。然而，低剂量索拉非尼对宿主免疫和ACT反应的影响范围是多少仍不明确。在这里，我们使用了完善的 E.G7/OT-1 鼠模型，以了解连续低剂量索拉非尼对肿瘤微环境和转移的 CD8+ T 细胞的影响及其潜在机制。索拉非尼通过抑制 STAT3 和其他免疫抑制因子，降低免疫抑制因子的表达，增强转移的 CD8+ T 细胞的功能和迁移。CD8+ T 细胞用颗粒酶 B 启动子转导，用于驱动成像记者在过继转移之前可视化转移的 CD8+ T 细胞的活化和分布。与 CD8+T 细胞或索拉非尼单药组相比，联合治疗组发现了更好的 CD8+T 细胞活化和肿瘤抑制作用。索拉非尼治疗组不仅免疫抑制因子减少，髓源性抑制细胞（MDSCs）和调节性 T 细胞（Tregs）也减少，通过逆转免疫抑制微环境。这些结果表明，索拉非尼的肿瘤抑制作用不仅是通过根除肿瘤细胞，而且是通过改变肿瘤微环境，这对 ACT 的结果有显着帮助。

　　临床前和临床研究都表明，肿瘤微环境在限制 ACT 的有效性方面起着不可或缺的作用。阻断肿瘤微环境中免疫抑制的关键调控通路可以显着提高ACT的抗肿瘤作用。在本研究中，利用完善的 E.G7/OT-1 小鼠模型证明索拉非尼/索拉菲尼是一种用于 HCC 和 RCC 治疗的多激酶靶向药物，可以逆转不利的肿瘤微环境并提高 ACT 的治疗效果。体外和体内。

　　由于大多数化疗药物的免疫抑制作用，ACT 与化疗联合用于癌症治疗仍然具有挑战性。紫杉醇 (TAX)、顺铂 (CIS) 和多柔比星 (DOX) 等化疗药物已显示出一些积极的免疫学作用，可能有助于 ACT 的结果。这些药物通过多种机制改变免疫微环境，包括由肿瘤细胞凋亡诱导的更好的免疫原性、肿瘤相关抗原和 6-磷酸甘露糖 (M6P) 表达的上调以及 Fas/TRAIL 依赖性通路的调节使肿瘤细胞对细胞毒性 T 淋巴细胞敏感，消除 Treg和肿瘤基质的破坏导致大量肿瘤浸润 CTL。索拉非尼下调 E.G7 细胞中 TGF-β 和其他免疫抑制因子（如 IDO、VEGF 和 IL-10）的表达。不仅 TGF-β 表达降低，而且在索拉非尼治疗后发现细胞表面的 TGF-β I 受体减少。表明索拉非尼阻断了对肿瘤进展和免疫抑制至关重要的 TGF-β 信号通路。据报道，IDO、VEGF 和 IL-10 可降低 CD8+ T 细胞的活性，增加 CD4+ T 细胞中 Treg 的转化，并使巨噬细胞极化为免疫抑制性 M2 亚型。另一方面，肿瘤浸润淋巴细胞（TILs）的数量也对ACT的结果有影响。血管生成与 CD8+ T 细胞的浸润和其他免疫抑制细胞的调节高度相关，而索拉非尼已被证明可靶向内皮细胞中 VEGFR 的表达并降低癌细胞中VEGF的表达。此外，CCL2/MCP-1 作为单核细胞趋化因子和免疫抑制因子，通过 TAM 和 Treg 的募集抑制 CD8+ T 细胞浸润。CCL2/MCP-1在免疫抑制中起关键作用，因此抑制CCL2/CCR2通路可能成为癌症治疗的一种可能途径。已证明延长 CD8+ T 细胞的存活与 Bcl-2（一种抗细胞凋亡基因）转导 ACT 的结果有关。FasL 通过使活化的 CD8+ T 细胞对 Fas 介导的细胞凋亡途径敏感，在免疫抑制中发挥重要作用。瑞安等人证明通过使用 FasL-/low细胞系，阻断 FasL 表达会抑制体内免疫逃逸。索拉非尼治疗后E.G7的FasL表达降低，这可能抑制Fas/FasL介导的CD8+T细胞凋亡。

　　为了研究索拉非尼/索拉菲尼如何增强体内CD8+ T 细胞的功能，我们将五次连续低剂量的索拉非尼（7.5 毫克/公斤/天）应用于完善的 E.G7/OT-1 鼠模型，以了解免疫调节和澄清这种方法是否可以应用于ACT。根据我们的初步研究确定了用于联合治疗的 CD8+ T 细胞的数量。不同数量的CD8+T细胞被转移到E.G7荷瘤小鼠体内，从过继转移后的第9天，当转移了200万或更少的CD8+T细胞时，肿瘤再次生长。相反，在接受5×106或10×106CD8+ T细胞的小鼠中发现完全的肿瘤抑制。因此，2×106CD8+ T 细胞 (2T) 用于与低剂量的索拉非尼组合。2T+sora组CD8+T细胞活化与5T组相似，明显优于2T单独组。这两组获得的峰值信号在ACT后第3天检测到，但2T+sora组的信号存在时间长于5T组。值得注意的是，5T 和 2T+sora 组的肿瘤从第 3 天开始缩小这两组之间没有显着差异，这表明将较少数量的 CD8+ T 细胞与连续低剂量的索拉非尼组合作为癌症治疗的潜在治疗策略。此外，如蛋白质印迹所示，索拉非尼/索拉菲尼在连续低剂量索拉非尼治疗后降低了 STAT3 和相关的免疫抑制因子。其中一些蛋白质被认为与 Tregs 和 MDSCs 的扩增有关，两者都可能导致 CD8+ T 细胞的抑制。在这里我们发现这两种免疫抑制细胞在连续低剂量索拉非尼治疗后减少。这些发现与曹等人报道的结果相似。在小鼠肝癌模型中，荷瘤小鼠接受 30 mg/kg/天的治疗两周后，Tregs 和 MDSCs 的百分比显着降低。虽然两种类型的细胞都减少了，但在我们的研究中没有发现任何意义。造成这种差异的可能原因可能是由于本研究中使用的剂量较低，即 7.5 mg/kg/天（Cao 等人使用的剂量的四分之一），以及较短的治疗时间（5 天） .最近，陈等人。还表明索拉非尼降低了携带 HCC 的动物模型中 CD8+ T 细胞上的 Tregs 数量和 PD-1 表达，这与我们的研究结果相似。

　　我们的发现可能为接受索拉非尼/索拉菲尼作为标准治疗的转移性肾细胞癌或肝细胞癌患者的临床 ACT 研究铺平道路。一旦针对这一特定癌症实体的 I 期临床研究成功进行，人们甚至可能会考虑在不同癌症实体（包括黑色素瘤或多发性骨髓瘤）中使用低剂量索拉非尼作为免疫疗法的增强剂，例如 ACT 或其他疗法。未来值得发现其他免疫调节剂如索拉非尼与ACT或其他免疫疗法联合使用，以及低剂量索拉非尼对ACT中其他免疫细胞如DCs和TAMs的影响，以进一步阐明ACT 中免疫系统和肿瘤微环境的全景图。综上所述，通过抑制 STAT3。抑制这些免疫抑制因子会降低 Treg 的转化和 MDSC 的诱导，否则会阻碍 CD8+ T 细胞的功能。负责肿瘤细胞中色氨酸代谢的 IDO 在索拉非尼/索拉菲尼治疗后内源性和外源性均降低。当这些免疫抑制因子和细胞下降时，转移的 CD8+ T 细胞可能会表现出更好的功能和存活时间并提高 ACT 的治疗效果.此外，在 ACT 之前给予低剂量的索拉非尼可以减少转移的 CD8+ T 细胞的数量，这是阻碍 ACT 应用的障碍之一。使用这种组合策略将促进 ACT 的使用；另一方面，较低剂量的索拉非尼和 CD8+ T 细胞也可能提高患者的生活质量。

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