达克替尼/达可替尼人膀胱癌模型中的抗肿瘤活性评价

　　人类表皮生长因子受体 (HER) 家族的成员在膀胱癌进展中起重要作用，并且可能是化疗耐药性发展的基础。达克替尼/达可替尼是一种不可逆的酪氨酸激酶抑制剂，对表皮生长因子受体 (EGFR)、HER2 和 HER4 的催化结构域具有结构特异性，对其他实体瘤具有强大的疗效。我们评估了达克替尼在表达不同水平 HER 家族受体的人膀胱癌细胞系中的抗肿瘤活性。这些细胞系也被建立为非肥胖糖尿病/严重联合免疫缺陷 (NOD/SCID) 小鼠的膀胱癌异种移植物，以评估达克替尼的体内活性.在表达升高水平的达克替尼靶受体的细胞中观察到显着的细胞毒性和细胞抑制作用，其中细胞凋亡和细胞周期停滞是抗肿瘤活性的主要机制。表达较低水平 HER 受体的细胞对达克替尼的敏感性要低得多。有趣的是，达克替尼在体外比曲妥珠单抗或西妥昔单抗更有效，并且与拉帕替尼相比，表现出对膀胱肿瘤异种移植物的生长抑制增加。达克替尼的药效学作用包括降低 E-cadherin (E-cad) 表达、降低 EGFR 和细胞外信号调节激酶 (ERK) 磷酸化以及减少有丝分裂计数。达克替尼还抑制了化疗耐药异种移植物中的肿瘤生长，并且与敏感异种移植物中的化疗联合使用时，与单独治疗相比，表现出更好的抗肿瘤作用。对异种移植小鼠的评估表明，这种组合广泛可行且耐受性良好。总之，达克替尼在人类膀胱癌模型中作为单一药物和与化疗联合使用时均表现出显着的活性。

　　人类表皮受体有望成为膀胱癌的治疗靶点。最近的临床前研究表明，可用的 HER 抑制剂具有抗肿瘤活性；然而，临床研究并未显示出有意义的临床疗效。缺乏基于生物标志物的患者选择以及化疗和靶向治疗的顺序可能会影响结果。其他潜在因素包括差异受体异二聚化、效力不足、靶向化合物的功效差和可逆结合、介导抗性的替代信号通路的激活。考虑到这些因素，我们在人类膀胱癌的临床前模型中测试了一种新的、有效的、不可逆的泛 HER 酪氨酸激酶抑制剂达克替尼。

　　达克替尼/达可替尼作为单药在体外和体内都表现出显着的抗肿瘤活性。UM-UC-6 细胞中 50 nmol/L 和 UM-UC-9 细胞中 100 nmol/L 的单次处理注意到细胞抑制作用，这转化为药理学上适用的体内人体给药。UM-UC-3 细胞活力受到的影响较小，可能对应于不同的靶蛋白表达。与体外UM-UC-6 细胞中等浓度的其他抗 HER 化合物相比，达克替尼单次治疗（体外最高测试浓度）与西妥昔单抗或曲妥珠单抗相比活性更高，与拉帕替尼相当。UM-UC-9 异种移植物的直接比较表明达克替尼优于拉帕替尼。这可以通过更广泛的抑制活性（例如，HER4）、更高的效力（EGFR 和 HER4 的 IC50 更低）、不可逆的受体结合或生物利用度的差异来解释。HER4 在膀胱癌中的作用值得进一步研究，考虑到 HER 单体的异二聚化可导致受体激活、细胞增殖、生长、存活和持续的致癌信号传导，同时它可以规避膀胱癌中的单体抑制。然而，尚未显示 HER4 基因在人类膀胱癌中具有特征性的扩增或突变。在获得性西妥昔单抗耐药的新型体内模型中，同时抑制 EGFR/HER2 被证明可以克服对西妥昔单抗的耐药性。达可替尼还被证明可以克服其他几种癌症中对 HER 抑制剂的获得性耐药性，这意味着更广泛的 HER 家族抑制可能导致更强大的信号消除。

　　达克替尼/达可替尼抑制 UM-UC-6 细胞中 EGFR 的残基特异性磷酸化及其下游信号传导（ERK、Akt），并导致 G1 期阻滞和细胞凋亡诱导。有趣的是，对 HER2 磷酸化没有抑制作用。UM-UC-9 细胞具有突变的 p53，这可能使它们对达克替尼诱导的细胞凋亡具有抗性，但可能容易受到生长停滞的影响。UM-UC-3 细胞具有磷酸酶和张力蛋白同源物 (PTEN) 缺失，这可以解释其强大的 p 蛋白激酶 B (p-AKT) 表达。对下游信号的不同影响可以通过信号通路之间的动态“串扰”来解释，这些通路在细胞系之间可能存在很大差异。例如，在 UM-UC-6 细胞中，ERK 和 Akt 通路信号传导似乎提供了对达克替尼反应的药效学相关性。我们的研究结果与来自达克替尼治疗几种癌症模型（肺、胆管、胃和乳腺）的类似观察结果一致，证实 G1 期阻滞和诱导细胞凋亡是两种抗肿瘤活性机制，与癌细胞类型无关.未来也可以探索替代机制（自噬和/或失巢凋亡）的评估。

　　吉西他滨-顺铂化疗是晚期膀胱癌的标准一线治疗。然而，除了毒性之外，反应并不持久，几乎所有患者都会复发并最终死于该疾病。美国没有 FDA 批准的二线治疗，而 HER 过表达被认为介导化疗耐药和/或疾病进展。在这项研究中，达克替尼在化疗耐药的 UM-UC-6 膀胱癌异种移植物中建立了显着的活性。此外，达克替尼+化疗的组合是可行和可耐受的，并且在对化疗敏感的UM-UC-9异种移植物中优于单独化疗。因此，我们的研究结果导致了旨在评估安全性的 I 期临床试验概念的发展，吉西他滨-顺铂联合方案与达克替尼作为 HER 表达晚期膀胱癌患者一线治疗的可行性和推荐的 II 期剂量。启动后，这将是第一个在人体中评估达克替尼与吉西他滨-顺铂的试验。

　　结论

　　总之，我们的结果证明了达克替尼/达可替尼在人膀胱癌的体外和体内模型中具有显着的单药活性。达克替尼的抗肿瘤活性与 HER 靶受体的表达和下游信号通路的抑制相关，最终导致 G1 细胞周期停滞和诱导细胞凋亡。此外，达克替尼联合吉西他滨-顺铂化疗被发现是可行的、安全的并且优于单独的吉西他滨-顺铂方案。微信扫描下方二维码了解更多：