相信大家对CAR-T疗法听过很多，那么到底这个是怎么生产出来的呢？下面康安途为您解析CAR-T的生产过程。（1）T细胞的收集。从患者的血液中收集T细胞主要是采用离心的方法，对患者的血液进行离心，收集MNC（单个核细胞）细胞层，包括T细胞。由于患者个体差异、肿瘤类型不同，加上各种因素导致T细胞的产量明显不同。
特别是对于有过很多治疗史的晚期恶性肿瘤患者，收集足以用于CAR改造的T细胞可能有点困难。除了量，血流通过机器的速度也有要求，必需持续稳定，如果流速出现下降，会导致收集到的细胞纯度很低。MNC层必须去除掉其他细胞的污染，比如红细胞和粒细胞、淋巴细胞和单核细胞，甚至可能含有的循环肿瘤细胞。MNC的收集和保存必须标准化。离心取T细胞层。（2）T细胞的富集。可以通过淘析分离和免疫磁珠来富集T细胞。后者要更好，抗体磁珠缀合物在磁场中可以高特异性分离纯的T细胞亚群。免疫磁珠法富集T细胞。（3）基因改造。鼠源逆转录病毒或慢病毒的电穿孔（右图）或病毒载体可以实现稳健的CAR基因递送。新一代的CAR-T细胞可以进行其他改造，包括基因编辑。ZFNs，TALENs，归巢核酸内切酶-TALENs和CRISPR RNA引导的核酸酶可以结合特异的DNA序列，这基于靶向区域的氨基酸序列，直接切割和基因座破坏。
病毒转导和电穿孔。（4）激活和体外扩增。可以用抗CD3 /抗CD28免疫磁珠或可再生细胞慢病毒修饰的LV aAPCs组成的aAPC系统来刺激T细胞，LV aAPCs可以装备一系列共刺激配体以诱导大量增殖。T细胞激活和扩增。（5）质量评测和临床使用。用于临床试验之前需要确定成分、纯度、无菌性、安全性和效力。测试通常包括存活力、免疫分型[包括CAR-T细胞的百分比]、革兰氏染色、内毒素、细菌和真菌测试以及支原体测试。临床方案规定了使用途径，包括系统静脉内输注或肿瘤内/组织注射。总之，离体基因修饰，激活和扩增需要先进的设备和专业知识。根据现行的良好生产规范（cGMP）制造这些产品必须在健全的质量管理体系范围内运作。处理配制产品必须保持产品的稳定性和具备监管链。
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