阿比特龙abiraterone诱导的SLCO1B3过表达由miRNA表达介导

　　通过 qPCR 进一步验证了阿比特龙（abiraterone）治疗对处理用于 NanoString 分析的样品中lt-SLCO1B3和 hsa-miR-579-3p 表达的影响。概括 NanoString 结果，qPCR 分析发现在阿比特龙治疗后 hsa-miR-579-3p miRNA 表达降低，lt-SLCO1B3mRNA 表达增加。这与 miRNA 介导的lt-SLCO1B3 抑制是一致的。使用荧光素酶报告系统，我们进一步证明了 hsa-miR-579-3p 确实与SLCO1B33'UTR 结合，方法是将这个序列克隆到 psiCHECK-2 载体中，该载体含有海肾和连续表达的萤火虫荧光素酶报告基因。接下来，我们将 psiCHECK-2-SLCO1B33'UTR 质粒（或空载体质粒）与 hsa-miR-579-3p 模拟物或非特异性模拟物（阴性对照）一起在 22Rv1 细胞中进行共转染，然后检测荧光素酶活动。

　　双荧光素酶报告基因检测证实SLCO1B3是 hsa-miR-579-3p 的靶基因，因为我们的数据表明，与阴性对照相比，当用 hsa-miR-579-3p 模拟物处理细胞时，荧光素酶报告基因的活性显着降低。表明 hsa-miR-579-3p通过与其 3'UTR 结合直接靶向SLCO1B3 。我们还表明，在用缺乏 3'-UTR 的 psiCHECK-2 载体转染的细胞中没有观察到显着差异，进一步证实了与 SLCO1B3 的 3'UTR 的特异性 hsa-miR-579-3p 结合相互作用。与载体 DMSO 处理的对照相比，用 psiCHECK-2-SLCO1B3 3' UTR 质粒转染并用阿比特龙处理的细胞中荧光素酶活性恢复并进一步增加，表明阿比特龙处理降低了 hsa-miR-579-3p miRNA 表达，导致在增加的SLCO1B3报告基因活动中）。这些结果直接支持我们从 NanoString 和 qPCR 分析的发现，即 hsa-miR-579-3p 与SLCO1B33'UTR 结合，并为由 hsa-miR-579-3p 介导的阿比特龙诱导的SLCO1B3表达的机制提供了额外的证据。

　　阿比特龙是 CRPC 最常用的处方药之一，可诱导22Rv1 和 VCaP 细胞以及携带 22Rv1 肿瘤异种移植物的小鼠中SLCO1B3转录物的显着上调。在 22Rv1 和 VCaP 细胞中，总 SLCO1B3表达水平随着阿比特龙治疗以剂量依赖性方式增加。我们证明阿比特龙介导的SLCO1B3转录物增加独立于雄激素刺激发生，这与我们的发现一致，即在雄激素非依赖性 PC3 细胞系中阿比特龙治疗对SLCO1B3表达没有影响（数据未显示）。我们之前已经证明 PC3 细胞具有更高的SLCO1B3内源性表达比 22Rv1 细胞1和具有低水平的 CYP17A1 酶表达；因此，这些细胞可能对阿比特龙治疗的效果不敏感。

　　总之，我们已经证明 CYP17 抑制剂可以刺激已知睾酮摄取转运蛋白SLCO1B3的表达。我们证明了阿比特龙诱导的SLCO1B3表达的机制是由 miRNA、hsa-miR-579-3p 介导的。据我们所知，这是阿比特龙治疗耐药机制的第一份报告，该机制归因于 miRNA 调节控制 OATP1B3 的表达，OATP1B3 是一种雄激素转运蛋白，与通过增加残留雄激素摄取的机制驱动 ADT 耐药有关进入前列腺肿瘤。此外，hsa-miR-579-3p 可作为阿比特龙耐药的潜在治疗生物标志物。更多详情可咨询下方微信。