将小鼠随机分为五组,如下:(1)预处理:在MAYV感染前一天用法匹拉韦治疗的小鼠(n = 16),(2)同时治疗:在MAYV感染前一小时用法匹拉韦治疗的小鼠(n = 16),(3)后处理:MAYV感染后两天用法匹拉韦治疗的小鼠(n = 16),(4)CTRL+:未经治疗的MAYV感染小鼠(n= 8)和(5)CTRL-:在没有MAYV感染的情况下接受法匹拉韦治疗的小鼠(n= 8)。
在尾巴上标记小鼠,然后在隔离器中以三到四人为一组饲养在笼子里。法匹拉韦(300mg/kg)连续5天口服给药。在治疗和/或暴露于MAYV后长达7天,每天监测小鼠。每组小鼠数量的一半在7天后处死,其余小鼠在MAYV感染或法匹拉韦治疗后14天处死。
在感染后7天和14天(dpi)解剖小鼠器官,以确认MAYV RNA和感染性病毒颗粒的存在。将组织放置在组织匀浆珠管(Precellys Lysing试剂盒,Bertin Tech.,Montigny-le-Bretonneux,法国)中,使用Dulbecco的改良Eagle培养基(DMEM)。匀浆后,将100 μL混合物转移到含有RNA提取裂解缓冲液的管中。将剩余的匀浆离心,并将上清液储存在-80直至使用。收集血液,向RNA提取裂解缓冲液中加入20 μL。
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